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檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)
先包被內(nèi)源性素（AEA）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)
準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，
TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的。人內(nèi)源性素ELISA試劑盒顏色的深淺和樣品中的內(nèi)源性素（AEA）呈正相關(guān)。用
酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞
刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地
分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘
取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于
-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
人內(nèi)源性素ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解
后再使用。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為0 的S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5 倍，zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實(shí)際濃度。
4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱(chēng)96 孔配置48 孔配置備注
微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無(wú)
樣本稀釋液6mL 3mL 無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP 10mL 5mL 無(wú)
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A 6mL 3mL 無(wú)
底物B 6mL 3mL 無(wú)
終止液6mL 3mL 無(wú)
封板膜2 張2 張無(wú)
說(shuō)明書(shū)1 份1 份無(wú)
自封袋1 個(gè)1 個(gè)無(wú)
注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、6.25、12.5、25、50、100 pg/mL
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20 稀釋?zhuān)? 份的20×洗滌緩
沖液加19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min 后甩盡
孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次。
2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封
袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不
加。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶
（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴
鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去
洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi)，在450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的
OD 值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：在Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)
OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)，按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣
本濃度值。
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值，大于等于
0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6 個(gè)月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，人內(nèi)源性素ELISA試劑盒不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所
產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者
承擔(dān)。

Y118683 趨化因子C-X3-C-基元配體1(CX3CL1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1) 96T Homo sapiens (Human)
Y118684 纖連蛋白(FN)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Fibronectin (FN) 96T Homo sapiens (Human)
Y118685 纖連蛋白(FN)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Fibronectin (FN) 96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
Y118686 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(FGF4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Fibroblast Growth Factor 4 (FGF4) 96T Homo sapiens (Human)
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Y118688 凋亡相關(guān)因子配體(FASL)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Factor Related Apoptosis Ligand (FASL) 96T Mus musculus (Mouse)
Y118689 凋亡相關(guān)因子(FAS)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS) 96T Mus musculus (Mouse)
Y118690 凋亡相關(guān)因子(FAS)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS) 96T Homo sapiens (Human)
Y118691 E選擇素(SELE)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 96T Rattus norvegicus (Rat)
Y118692 E選擇素(SELE)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 96T Mus musculus (Mouse)
Y118693 E選擇素(SELE)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 96T Homo sapiens (Human)
Y118694 紅細(xì)胞生成素(EPO)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Erythropoietin (EPO) 96T Mus musculus (Mouse)
Y118695 紅細(xì)胞生成素(EPO)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Erythropoietin (EPO) 96T Homo sapiens (Human)
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Y118697 上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法) CLIA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 96T Homo sapiens (Human)